SUMO 蛋白酶
描述:
SUMO蛋白酶,也称为UIP蛋白酶,是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶,来源于酵母编码的MIP1基因,其特异性识别UBL蛋白的三级结构-SUMO(Small Ubiquitin-Like Modifier)。SUMO蛋白酶能够识别完整的SUMO序列,并依赖正确的蛋白质构象,仅有完整的序列,没有正确的结构,SUMO酶是不能对目标蛋白进行切割的。因此,该酶是目前切割特异性最好的蛋白酶,可在较广泛的作用温度和PH范围(pH7-9)内发挥作用,切割的最佳温度为30°C。SUMO蛋白酶的识别序列如下,切割位点位于QIGG之后
SDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG
本公司生产的SUMO蛋白酶含有双His标签,酶切后,可通过Ni-NTA Resin亲和纯化,很容易地将SUMO去除。双His标签保证了,SUMO蛋白酶高亲和力的结合Ni-NTA,以最大限度的去除SUMO蛋白酶。该SUMO蛋白酶分子量约26kD,比活>10E5/mg。
单位定义
在1XSUMO Protease Buffer-Salt (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.2% Igepal, 1 mM DTT)中,30°C反应1h,剪切>85%的2 μg对照底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
应用
融合蛋白标签剪切去除。
储存
SUMO蛋白酶置于-70°C可保存2年;-20°C可保存6个月,避免反复冻融;10×SUMO Buffer置于-20°C保存即可。
操作方法
若蛋白为热不稳定性,请在 4°C 孵育较长时间或增加酶的用量。
1. 在 EP 管中配制如下反应体系
2. 混匀上述体系后于 30°C 孵育,在 1、2、4、6 小时分别吸出 30 μl 上述反应液,置于单独的 EP 管中。
3. 向上述 EP 管中加入 20 μl 2×SDS Loading Buffer, 置于-20°C。
4. 取 30 μl 样品进行 SDA-PAGE 分析。
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