X-gal储存液(20mg/ml)

中文名:X-gal储存液(20mg/ml)

英文名:X-gal storage solution

CAS:N/A级别:N/A

分子量:N/A分子式:N/A

纯度:N/A储存条件:-20°C

产品简介

中文别名：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷

英文别名：5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside; 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside

物理性质：白色至浅黄色粉末，溶于DMSO，溶解度可达20mg/mL。也溶于DMF。

产品用途：

X-Gal是β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）的显色底物，在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物。基于这个特点，当pUC系列载体DNA以lacZ 缺欠细胞作为宿主进行转化时，或M13噬菌体载体DNA进行转染时，如果在培养基中加入X-Gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互补性，可以根据是否呈现白色而方便地挑选择出基因重组体。

常用于β-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选。

配制储存液

称取200 mg X-Gal于15 mL 离心管，向其中加入10 mL DMF，旋涡震荡使其充分溶解后于-20℃避光保存，正确操作下，有效期可达5-12个月，如小量频繁使用，建议分装成1 mL/管后避光冻存。

蓝白斑筛选

1. X-Gal、IPTG 加入琼脂培养基溶液

1）高压灭菌已加琼脂的培养基，并冷却到50℃左右。

2）每毫升培养基内加入10 μL 20 mg/mL X-gal溶液、10 μL 0.1 M的IPTG（使其终浓度达到1 mM）；

3）加入适量抗生素；

4）混匀后按照平板大小倒入适量培养基，待培养基冷却至室温后，接种细菌于37℃过夜培养。

2. X-Gal、IPTG加到琼脂平板表面

1）于无菌超净工作台制备平板（如LB 琼脂板）；

2）取40 μL 100 mM IPTG和120 μL 20 mg/mL X-gal混合，均匀地涂布于准备好的平板上；

注：平板边缘较难充分涂布均匀，容易产生假阳性，因此，为了得到更好结果，建议后续操作中尽可能在平板中间挑取单克隆。

3）37℃孵育直至所有液体被吸收（30 min或更长）。接种细菌于37℃过夜培养。

做酵母菌EGY48,使用方法参考10×BU溶液（pH 7.0，过滤除菌）;做酵母菌YM4271,使用方法参考 Z buffer。