细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

中文名:细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

英文名:细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

CAS:N/A级别:N/A

分子量:N/A分子式:N/A

纯度:N/A储存条件:-20°C

产品简介

产品组成：

产品介绍：

  自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。

  单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine, MDC)是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355 nm。阻断滤光片波长512 nm。细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)，适用于培养细胞的自噬染色，又称为MDC染色液，可与EB合用双染。

自备材料：

荧光显微镜、低速离心机、EB、载玻片、盖玻片。

使用说明(仅供参考)：

(一) MDC单独染色：

1. 用去离子水稀释10×Wash buffer至1×。

2. 800g离心5 min，收集细胞，用300～400 μL的1×Wash buffer清洗细胞，弃上清。

3. 加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/mL。

4. 取90 μL的细胞悬液至新的EP管中，加入10 μL的MDC Stain，轻轻混匀。

5. 室温避光染色15～45 min。

6. 800g离心5 min，收集细胞，用300～400μL的1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。

7. 加入100 μL的Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。

8. 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。

注：贴壁细胞可以不消化，直接去除培养液，用1×Wash buffer清洗后进行染色。MDC的量根据细胞数量进行调整。染色时间可适当延长根据染色结果进行调整，染色结束后，用1×Wash buffer清洗观察即可，不加Collection buffer。

(二) 与EB双染色：

1. 用去离子水稀释10×Wash buffer至1×。

2. 800 g离心5 min，收集细胞，用300～400μL的1×Wash buffer清洗细胞，弃上清。

3. 加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/mL。

4. 取90 μL的细胞悬液至新的EP管中，加入10 μL的MDC Stain和0.2μM的EB染色液，轻轻混匀。

5. 滴加于在玻片上，室温避光染色15～30min，加盖玻片。

6. 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm)，计数并拍照。

染色结果：

正常细胞：细胞被均匀染成黄绿色荧光。

凋亡细胞：染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒。

注意事项：

1. MDC Stain和EB，试剂有一定毒性，请小心操作。

2. 吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

3. 该培养基仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其它用途。

4. 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。