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土壤中性蛋白酶(SNPT)测试盒 可见分光光度法 XYS9071

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。S-NPT在中性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

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土壤中性蛋白酶(SNPT)测试盒说明书

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。S-NPT 在中性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

测定原理:

中性条件下,S-NPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在 680nm 有特征吸收峰。

实验中所需仪器及设备:

可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1ml 玻璃比色皿、蒸馏水

试剂组成和配置:

试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 6ml 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂 4℃保存;

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 2mL 试剂七,沸水浴加热溶解,然后加入 8ml

试剂一,充分混匀备用,用不完的试剂 4℃保存;

试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 40ml 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃保存;

试剂五:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;

试剂六:液体 1.5mL×1 支,0.05mg/ml 标准酪氨酸溶液,4℃保存;

试剂七:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;

样品处理:

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。

测定操作:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 680nm,蒸馏水调零。

2、样本测定:

2023091501593762268

混匀,40℃水浴 20min,8000g 25℃离心 10min,取上清液 1mL,680nm 下读取各管吸光值A

注意:标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

S-NPT 活性计算:

单位定义:每天每 g 土样中产生 1mg 酪氨酸为一个 S-NPT 活力单位。

S-NPT(mg/d/g 土样)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=24×(A 测定管-A对照管)÷A 标准管

C 标准管:标准管浓度,0.05mg/mL;V 反总:反应体系总体积,0.4mL;T:反应时间,30min=1/48d; W:样本质量,0.04g。

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