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果胶酯酶测试盒/果胶甲酯酶测试盒 NaOH滴定法 XYP9081

果胶酯酶, 属果胶酶系,亦称为果胶酶、果胶甲酯酶、果胶氧化酶。催化水解果胶长链上的甲氧酯水解产生小分子物质果胶酸和甲醇, 从而增加果胶在水中的溶解度。

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果胶酯酶测试盒/果胶甲酯酶测试盒说明书

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

果胶酯酶, 属果胶酶系,亦称为果胶酶、果胶甲酯酶、果胶氧化酶。催化水解果胶长链上的甲氧酯水解产生小分子物质果胶酸和甲醇, 从而增加果胶在水中的溶解度。广泛存在于高等植物和可以降解细胞壁的细菌和真菌中,起内源调控植物细胞壁上及细胞之间果胶含量的作用,在食品工业中具有及其重要的作用和开发前景。

测定原理

果胶酯酶催化水解果胶分子释放 H+,使反应体系的 pH 下降,用碱液维持体系的 pH 始终保持在 7.8(酚酞指示剂维持在粉红色),通过碱消耗的 NaOH 量反映果胶酯酶的活性。

需自备的仪器和用品

天平、研钵、离心机、烘箱。

试剂的组成和配制

提取液:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前每瓶加双蒸水 100mL 充分溶解。(如有不溶现象,磁力搅拌器 40℃加热,或者超声波清洗器超声至完全溶解)

试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加少量蒸馏水溶解,然后转入 500mL 容量瓶,用蒸馏水定容至 500mL。(磁力搅拌器 40℃加热溶解 3 小时左右至完全溶解,提前制备)

试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。易挥发,使用后及时用封口膜封口。

试剂三:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:用蒸馏水将试剂三稀释 5 倍,得试剂四。

样品处理

称取 1g 组织样品,加入 2mL 提取液冰浴充分研磨(研钵提前-20℃预冷 10min,提取液提前4℃预冷。可以根据客户自己的样本特殊性,自行按比例调整),12000g、4℃离心 15min,取全部上清液待测。

测定操作

1. 试剂一于 37℃烘箱保温 10min,样本全部提取上清(约 2mL)分别转移至 15 mL 离心管或者试管中。

2. 向样本上清中分别加入 50μL 试剂二,混匀。然后每管加入 8 mL 试剂一混匀,并用试剂四调节 pH 至 7.8(粉红色)。

3. 将上述各离心管或试管放置 37℃烘箱 60 分钟。每隔 20 分钟用试剂四调节 pH,使 pH维持在 7.8(粉红色)。记录所消耗的试剂四的体积 V(mL)。

计算公式

酶活定义:每 g 组织每分钟消耗 1μmol NaOH 定义为一个酶活单位 U。

PE 活性(U/g)= 20VF/(TW)= VF/(3W)

V:滴定所消耗的试剂四的量,mL;T:反应时间,60 min;F:样品稀释倍数;W:样品质量,g

注意事项

1. 试剂一提前预热,保证酶反应速率。

2. 实验前先做预实验,如果酶活力太高,适当调整样本稀释倍数,如将样品稀释 2-5 倍进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

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