Annexin V-APC / 7-AAD 双染细胞凋亡检测试剂盒

产品简介：

产品背景：

细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。在体内，巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的 PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除，因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应，而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。 

AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。PS 外翻发生在细胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前，这使得 Annexin V 与 PS 的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。 

检测原理：

在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。

Annexin-Ⅴ能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。用标记了APC的AnnexinⅤ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。细胞坏死的过程中也会发生细胞膜损伤，坏死的细胞会结合 Annexin

V-APC。

Annexin V-APC 通常与细胞膜非渗透性核酸荧光染料联合使用以检测凋亡细胞。常用的染料是 7-AAD。正常细胞和早期凋亡细胞的细胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，7-AAD能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色。

7-AAD/Annexin V-APC试剂盒将Annexin Ⅴ与7-AAD匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。坏死细胞可以同时与 Annexin V-APC 和7-AAD结合显色，而7-AAD则被排除在活细胞（APC 阴性）和早期凋亡细胞（APC 阳性）之外。在没有巨噬细胞的情况下，凋亡的最后阶段会像细胞坏死一样发生整个细胞的解体，从而使凋亡晚期的细胞也同时被 APC 和7-AAD结合染色呈现双阳性。 

在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为（APC-/7AAD-）；右上象限是非活细胞，即坏死细胞，为（APC+ /7AAD + ）；而右下象限为凋亡细胞，显现（APC+

/7AAD -）。