YM4271感受态细胞

中文名:YM4271感受态细胞

英文名:YM4271 Chemically Competent Cell

CAS:N/A级别:N/A

分子量:N/A分子式:N/A

纯度:N/A储存条件:-80°C

产品简介

产品组成：

基因型：

MATa, ura3-52, his3-Δ200, ade2-101, ade5, lys2-801, leu2-3,112, trp1-901, tyr1-501, gal4Δ, gal80Δ, ade5::hisG

产品说明：

  YM4271菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株EGY48、Y187等通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker 为：trp1, leu2, ura, 报告基因为：HIS3。可用于酵母双杂，酵母单杂或异源蛋白表达等试验。

使用方法：

1. 取YM4271感受态细胞100 µL于冰上融化，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA(95-100℃，5min，快速冰浴，重复一次)10 µL，PEG/LiAc 500 µL并吹打几次混匀，30℃水浴30 min (15min时翻转6-8次混匀)。

2. 将离心管置于42℃水浴15 min(7.5 min时翻转6-8次混匀)。

3. 5000 rpm离心40 s弃上清，ddH2O 400 µL重悬，离心30s弃上清。

4. ddH2O 50 µL重悬，涂板，29℃培养48-96 h。

注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4. YM4271菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物 P-ribosylamino imidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90 h培养可见直径1 mm克隆。