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Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit XY91011

Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit

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¥ 1898.00 /瓶
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Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit

中文名:Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit

英文名:Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit

CAS:N/A级别:N/A

分子量:N/A分子式:N/A

纯度:N/A储存条件:见包装

产品简介

储存温度:序号1-8常温保存;序号9需-20℃储存,蓝冰运输

产品组成:(0.5 L/pouch)

2021111001280405478


产品说明:

  Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit(酵母单杂培养基套装YM1010),含有用于Y187-pHis2系统酵母单杂交文库筛选的全套培养基,性价比更高。培养基以非常方便使用的铝箔袋形式包装,每个独立包装可以配制0.5 L的培养基。使用时仅需要将袋中的所有干粉倒入三角瓶或培养瓶中,加入0.5 L的ddH2O,然后121 ℃灭菌15 min即可。无需称量和调整pH值。

  Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit (YM1011)在试剂盒YM1010基础上增加了100 mL 3-AT溶液(2.5 M,过滤除菌)。

实验材料:

酵母菌株:Y187(缺陷基因型his3-200、trp1-901、leu2-3)

诱饵载体:pHis2-DNA(筛选标记Trp报告基因His)

文库载体:pGADT7-cDNA(筛选标记Leu)

实验步骤:

一、转化诱饵载体(参考Super转化试剂盒SK2402质粒转化步骤)

1. YPDA平板培养划线,活化Y187酵母菌种;挑酵母菌落于液体YPDA培养基摇菌培养;

2. 制备感受态并将pHis2-DNA转化进入感受态细胞;

3. SD/-Trp平板检测转化结果。

二、自激活检测

1. 制备不同3-AT浓度梯度的SD/-His/-Trp平板,3-AT的浓度一般设定在50-100 mM之间,并设置不含3-AT的对照;

2. 将上述转化产物稀释到单克隆水平(OD值<0.002),涂板。

3. 筛选出适宜的3-AT浓度。(如某浓度3-AT平板上的菌落弱小且稀疏,与对照相比差距明显,且延长培养时间也不会再生长,即为理想的3-AT浓度)

三、互作筛选(转化步骤参考Super转化试剂盒SK2402文库转化步骤)

1. 液体SD/-Trp培养基培养诱饵菌株Y187(pHis2-DNA),制备Y187(pHis2-DNA)感受态细胞;

2. 将pGADT7-cDNA文库转入Y187(pHis2-DNA)感受态细胞;

3. 转化产物涂SD/-Leu、SD/-Trp、SD/-Leu/-Trp平板各一块,用以计算转化效率;剩余转化产物全部涂SD/-His/-Leu/-Trp + X mM 3-AT(X为筛选所得浓度)平板50块(φ150 mm),培养3-5天;

4. 挑取SD/-His/-Leu/-Trp平板上克隆,PCR后(推荐SK2420,菌P法),测序鉴定;

5. 点对点验证。

培养基配制方法:

1. 一袋培养基干粉倒入三角瓶或培养瓶中,加0.5 L去离子水中溶解(琼脂冷水不溶)。

2. 无调整pH值,121 ℃高压灭菌15 min。

3. 液体培养基封好口避光、室温储存备用。

4. 固体培养基冷却到50 ℃左右倒入平板,室温凝胶,封口倒置4 ℃保存。

3-AT的使用方法:

1.计算所需平板的数量,配制培养基;

2.设置3-AT的浓度梯度;

3.灭菌筛选培养基,待培养基冷却到55 ℃左右,按设置浓度加入3-AT母液,摇匀后倒板;

4.标记每个平板的3-AT浓度,超净台冷却凝胶后,将转化产物涂板,28-30 ℃培养3-5天。


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