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R5421感受态细胞 XY91006CC

R5421 Chemically Competent Cell

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R5421感受态细胞

中文名:R5421感受态细胞

英文名:R5421 Chemically Competent Cell

CAS:N/A级别:N/A

分子量:N/A分子式:N/A

纯度:N/A储存条件:-80°C

产品简介

产品储存:-80 ℃保存,一年有效。

产品组成:

11.png


基因型:

MATα ura3-52 leu2 trk1Δ his3Δ200 his4-15 trk2Δ1 :: pCK64


产品说明:

  R5421酿酒酵母菌株为K+/钾离子缺陷型菌株,在文献中也称为CY162,MATα型,多用于 K+/钾离子转运蛋白的鉴定试验中,也可用于K+/钾离子通道或钠钾离子泵的鉴定试验。Transformation marker为:ura3,leu2,该菌株可以在含有100mM KCl的培养基中能正常生长,在含有5-10mM KCl的培养基中生长缓慢,当培养基中KCl浓度低于0.5 mM,R5421(CY162)细胞停止生长。R5421感受态细胞经特殊工艺制作,-80 ℃可保存六个月,pGADT7质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。


使用方法:

1. 取R5421感受态细胞100 µL于冰上融化的,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,Carrier DNA (95-100 ℃,5 min,快速冰浴,重复一次) 10 µL,PEG/LiAc 500 µL并吸打几次混匀,30 ℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

2. 将管放42 ℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

3. 5000 rpm离心40 s弃上清,ddH2O 400 µL重悬,离心30 s弃上清。

4. ddH2O 50 µL重悬,涂板,29 ℃培养48-96 h。


注意事项:

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4. R5421酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30 ℃;高于31 ℃,生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29 ℃,48 h培养可见直径1 mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD双缺平板 29℃,60-80 h 培养可见直径1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29 ℃,80-90 h培养可见直径1 mm克隆。



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