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柱式真菌 DNAout 2.0 XY9100303

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柱式真菌 DNAout 2.0

产品货号: XY9100303


产品规格: 50T


产品保存: 常温保存


产品简介:

真菌 DNA 提取是一个难题,一是因为真菌有菌丝体、孢子等多种完全不同的结构形态, 二是因为其细胞壁一般都很厚,比较难以破碎。本产品专门用于从真菌孢子和液体培养的真 菌细胞中提取 DNA。


产品特点:

1. 即开即用,提供包括玻璃珠、离心吸附柱在内的所有试剂和耗材。

2. 既可以采取液氮研磨法破裂真菌,也可用玻璃珠法破碎真菌,两种方法均属于物理 方法,远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好,也不容易带入外源真菌 DNA(注: 文献报道蜗牛酶或破壁酶中常常有外源真菌 DNA 污染,用于提取真菌 DNA 往 往会造成污染) 。

3.本方法提取一个样品只需要 20 余分钟,方便、快速和高效。

4.一次可以处理 5 mL 的过夜真菌培养物,所得的基因组 DNA OD260/OD280 一般都在 1.8 左右,长度一般在 20 kb 左右,每 mL 菌液的 DNA 产率一般在 1-3 ug。可以直接用于 PCR 和酶切等后续试验。


产品组成:

成分编号

大纸盒

包装

柱式真菌 DNAout 溶液 A

9100303a

25 mL

柱式真菌 DNAout 溶液 B

9100303b

25 mL

柱式真菌 DNAout 溶液 C

9100303c

75 mL

离心吸附柱

9100303d

50 套通用

洗柱液

9100303e

50 mL

DNA 洗脱液 2.0

9100303f

10 mL

酸洗玻璃珠,400um

9100303g

25 g


保存期: 一年。


自备试剂: 无菌水。


使用方法:

1. 收集菌体或孢子:

    1.1、对菌液: 取 3-5 mL 过夜培养的真菌菌液(OD600 一般在 1 以上)到干净的塑料离心管中,12000 rpm

    离心 2 分钟弃上清留菌体沉淀。

    1.2、对菌落: 用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落(约 50mg) ,转移到装有 1mL 自备无 菌水的干净的塑料离心管中,洗涤下接种环上的菌体。12000 rpm 离心 2 分钟弃上清留菌体沉淀。

    1.3、对孢子材料,一般取 0.1g 左右,直接加入到塑料离心管中,然后进入下一步操作。

2. 在上述真菌材料中加入自备的无菌水 1mL,振荡半分钟后 12000 rpm 离心 2 分钟弃上清留菌体沉淀。此步用于洗涤菌体。

3. 裂解真菌:

    3.1、液氮研磨: 在研钵中液氮研磨上述真菌材料成粉,然后转移到干净的离心管中,在离心管中加入500 uL 溶液 A,常温涡旋震荡 3 分钟。

    3.2、玻璃珠破碎法: 在没有液氮的条件下,采用此法。在菌体沉淀中加入 500 uL 溶液 A 和 0.5 克的 玻璃珠,常温涡旋震荡 10 分钟。

4. 在离心管中加入 500 uL 溶液 B,涡旋震荡 3 分钟,12000 rpm 离心 2 分钟,将上清液全 部转移到一个 5mL 的干净的塑料离心管中。

5. 在上清中加入 3 倍体积的溶液 C,颠倒数次混匀后,分三次上离心吸附柱,每次上柱后 均先室温放置 2 分钟,然后 12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉穿透液,再第二次上柱,重复上面 的操作,直到挂柱步骤完成。

6. 在离心吸附柱中加入 500 uL 通用洗柱液,12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉穿透液。此步可 以洗涤掉杂质。

7. 重复上步操作一次。

8. 12000 rpm 空柱离心 1 分钟。

9. 加入 50-100 uL DNA 洗脱液 2.0,室温放置 1 分钟以上,12000 rpm 离心 1 分钟,穿透液 即为真菌 DNA 样品。

10. 为了得到更多的 DNA 样品,可以重复上步操作 1-2 次。

11. 所得 DNA 即可立即使用或放冰箱长期保存。


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