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AO荧光染色试剂盒 XY90037DA

AO荧光染色试剂盒

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AO荧光染色试剂盒

产品简介:

Acridine Orange, AO属于三环杂芳香燃料,可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光染料。该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。因此AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有:1、插入性结合,AO嵌入核酸双链的碱基对之间,这种结合方式主要为AO与DNA的结合,其荧光发射峰为530nm,激发后呈绿色荧光;2、静电吸引,带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合,这种结合方式主要为AO与RNA的结合,其荧光发射峰为640nm,激发后呈红色荧光,少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此,吖啶橙嵌合到双链DNA分子中显绿色,与DNA单链或RNA结合时发桔黄色或橙红色荧光。

Leagene AO染色试剂盒(Acridine Orange Detection Kit)主要由AO Stain、AO Stain Buffer组成,常用于细胞凋亡的检测。染色后在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。AO使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。AO染色常与EB染色合用双染, EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

 

产品组成:

试剂(A): AO Stain

500μl

4℃ 避光

试剂(B): AO Stain Buffer(10×)

10ml

4℃

使用说明书

1份

自备材料:

荧光显微镜

低速离心机

PBS

细胞计数板

载玻片、盖玻片

 

操作步骤(仅供参考)

(一) AO单独染色

收集细胞(采用流式细胞仪检测时,应先固定细胞),用AO Stain Buffer(1×)清洗细胞1次,加入适量的AO Stain Buffer(1×)重悬细胞,计数并调节细胞浓度至106/ml。

取适量的细胞悬液和AO Stain,按照细胞悬液:AO Stain=19:1的比例混合,轻轻混匀。如果采用荧光显微镜下观察,一般取95μl细胞悬液和5μlAO Stain混合即可。

室温避光染色15min,滴加于载玻片上并加盖玻片或上 流式细胞仪分析。

荧光显微镜下观察(激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm),计数并拍照。

染色结果

正常细胞

细胞被均匀染成黄绿色荧光

凋亡细胞

染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒

 

 (二) AO/EB双染色

收集细胞,用AO Stain Buffer(1×)清洗细胞1次,加入适量的AO Stain Buffer(1×)重悬细胞,计数并调节细胞浓度至106/ml。

取适量的细胞悬液和AO Stain,按照细胞悬液:AO Stain=19:1的比例混合,并加入适量EB染色液,轻轻混匀。如果采用荧光显微镜下观察,一般取95μl细胞悬液和5μl AO Stain混合即可。

室温避光染色15min,滴加于载玻片上并加盖玻片

荧光显微镜滤光片515nm观察,计数并拍照。

染色结果

正常细胞

均匀染成绿色荧光

坏死细胞

细胞桔黄色荧光

凋亡细胞

染色质浓缩,细胞核碎裂,被染成大小不一、致密浓染的黄绿色颗粒或见胞质芽状突起。

计算细胞凋亡率和死亡率:

注意事项:

AO染色常与EB染色合用,可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

如有低温离心机进行离心效果更佳,同时应注意减少试剂暴露于强光下的时间。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期: 6个月有效。

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