即用型蓝白T载体A型（T7-SP6，有MCS）

产品及特点
本产品是用Xcm I酶切环状的可保种型蓝白T载体去掉一段1.3K的插入片段后得到的线性DNA片段(载体部分),其两个末端的5’都有一个突出的可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。
1．由于是通过Xcm I酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用TaDNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2．克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3．插入位点两侧有对称的常见酶切位点（如EcoR I)，便于对克隆的PCR片↓进行近一步的分析。
4．克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。

5．可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。

6.T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的a-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。

7.含有丝状噬菌体f1复制起始子，可以制备单链DNA。

规格及成分

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期两年。
自备试剂连接反应试剂，超纯水
使用方法
一.PCR产物的纯化和定量
1.将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分离。最好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。
2．在长波(360nm)紫外灯下快速切胶，尽可能切掉多余的凝胶。为避免密啶二聚体的形成,可以使用基因的DNA防护剂UV Erasol(CAT# : 60601)。

3.用基因的柱式DNABACK纯化回收PCR片段。溶解PCR片段的超纯水体积越小越便于后续操作。
4．将回收的片段与浓度已知的DNA Marker在含EB或绿如蓝染料的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的荧光强度而估测PCR纯化产物的浓度。注意:一般不推荐使用测OD260的方法，因为回收的DNA很珍贵，该方法需要比较多的DNA。

5.如果所得的DNA片段浓度较低，可以使用本公司核酸浓缩剂(CAT#:110801)将其浓缩到需要的浓度。
6.如果PCR片段为平末端，则需要用加A试剂盒处理，否则不能用于与T载体的连接反应。
二．连接反应
1.短暂离心装有T载体的离心管。

2．在两个离心管中加入下列成分:

3.用移液器吹打连接反应使之混匀后,16℃孵育12小时(或按T4 Ligase供货商提供的操作手册进行连接)。
三．细菌转化
1.将100 uL感受态细胞于冰上解冻。注意:最好使用转化效率在1×108cfu/ug DNA以上的感受态细胞进行转化，因为采用单碱基突出端进行连接不是很有效。
2．取5uL连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。

3.将管放入预加温到42℃的水浴中，热休克90秒。快速将管转移到冰浴中

仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。