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酶联免疫吸附实验(ELISA)技术服务

酶联免疫吸附实验(ELISA)技术服务

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    酶联免疫吸附实验(ELISA)技术服务
    ELISA 代测费是300元/盒子,常规指标的ELISA试剂盒,公司都有现货,购买这些试剂盒,可免费代测整理好的电子版实验报告客户提供收集好的标本(血清、血浆或细胞培养上清等),如果客户标本是组织,需要做组织匀浆和蛋白定量,组织匀浆是12元/标本,蛋白定量是200元/次

    ELISA检测的目的是为实验提供准确可靠的定量分析实验依据。为了保证实验数据的可靠性,在实验过程中必须坚持全面质量控制和全过程质量控制。在收集标本前都必须有一个完整的计划。

     

    • 注意事项:

    ◆  每个标本量收集体积= 100ul × 检测种类,如要做复孔,标本量收集体积= 100ul × 检测种类×2 。

    ◆  对于作某一个具体指标来说,最好先用一系列稀释度作一批标本测定,得出对实验有意义的一个稀释度(即测定剂量反应曲线),然后用一个最适稀释度测定即可。

    ◆  收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在 4 ℃ 备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 条件下保存。避免反复冻融。标本 2 -8 ℃ 可保存 48 小时, -20 ℃ 可保存 1 个月。 -70 度可保存 6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。

    ◆  血清标本采集时,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。

    ◆  为了保证尿液检测结果的准确性,必须正确收集尿液标本和保存。盛尿容器要清洁干燥。      

        最好使用一次性的容器(如塑料尿杯),避免因用药并清洗不干净而造成的污染,影响

        检测结果。尿液标本必须新鲜,留取后,应及时检测或保存,以免细菌繁殖。因在室温

    中久置后(尤其是夏季)尿中磷酸盐等可析出结晶而干扰检测。

    ◆       标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性

    反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。

    ◆  冻结标本融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。

    ◆  混浊或有沉淀的标本应先离心或过滤,澄清后再检测。

    ◆  反复冻融会使蛋白效价降低,所以待测标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。也可加入适当防腐剂。

    ◆  如果您在实验中遇到任何特殊问题,敬请咨询 400-821-2178

     

    • 标本类型

    ELISA常见的标本一般包括:

    ◆  液体类标本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

    ◆  培养细胞

    ◆  组织标本

    这些标本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。

     

    • 标本的保存

    一般说来,在5天内测定的标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冻存。

    对收集后当天进行检测的标本,储存在 4 ℃ 备用,如有特殊原因需要周期收集标本,

    将标本及时分装后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 条件下保存。避免反复冻融。

    标本 2 -8 ℃ 可保存 48 小时, -20 ℃ 可保存 1 个月。 -70 度可保存 6 个月。部分标本也可加入适当防腐剂,激素类标本需添加抑肽酶。

    • 标本的处理

    可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、细胞培养上清、细胞、组织等均可作标本以测定其中某种成份。有些标本可直接进行测定,有些则需经预处理。

    ◆ 血清:

    室温血液自然凝固 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

    ◆ 血浆:

    应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入 10 %( v/v )抗凝剂 ( 0.1M 柠檬酸钠或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。如有沉淀形 成,应再次离心。

    ◆ 尿液、胸腹水、脑脊液:

    用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

    ◆ 细胞培养上清:

    检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。检测细胞内的 成份时,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

    ◆ 组织标本:

    切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS或组织蛋白萃取试剂,缓冲液中可加入蛋白酶抑制剂。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。


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