A549 人肺癌细胞

Human Lung Cancer Cells

规格： 1*10 ⁶   

细胞介绍

该细胞系由D.J.Griad通过肺癌组织移植培养建系，患者为58岁白人男性。A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。

细胞特性

1） 来源：肺癌

2） 形态：上皮细胞样，多角形；贴壁生长

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

收到细胞拆包：

1. 请立即检查包装袋是否有破损或漏液，如有，请拍照并及时与技术联系。

2.请立即将细胞从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进行处理。

T25 培养瓶中的细胞操作步骤：

1. 75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部。

2. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）前三天照片为重要售后依据，不提供或未拍照默认收到状态良好。

3. 不要打开培养瓶盖，将细胞放入37度培养箱中静置3-4小时后再做处理，以稳定细胞状态。

贴壁细胞：若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。每瓶添加配制好的完全培养基 5-6ml。放到 37 度培养箱培养。待细胞密度到80%以上，进行传代。

悬浮细胞：将瓶内所有培养基离心收集，重悬计数根据密度进行分瓶，密度在 3x10^5/ml 为宜。 

注意：第一次传代比例建议 1:2，之后可根据细胞密度和增殖情况适当调整。

冻存管细胞的操作步骤：

1. 收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题，请即时联系。

2. 将细胞取出转移至-80 度冰箱(不超过一周）或液氮保存,建议尽早复苏。

3. 复苏第一管后有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。 注意：为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。

细胞传代：

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；

3. 弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。

细胞复苏：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2. 将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3. 弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。

细胞冻存：

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3. 用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4. 先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

适用范围:

本产品仅限于科学研究，绝不可作为人类或者动物疾病的治疗产品使用。