检测原理：

信裕生物生产的ELISA试剂盒采用“夹心法”:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的靶蛋白，生物素化的检测抗体与靶蛋白结合， SABC复合物与生物素化检测抗体结合，形成免疫复合物，加入TMB显色液后，若反应孔中有靶蛋白则显蓝色，加入终止液变黄色，检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，靶蛋白浓度与OD值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白的浓度。

试剂盒组分: （保存温度4℃）

本试剂盒适用于血清、血浆、组织匀浆及其它生物体液。

标本收集与试剂准备:

1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。待测样本应尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。

2. 洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水）

3. 标准品配制：取8个1.5ml离心管，分别标注S1,S2,S3,S4,S5,S6，S7,blank,第一管S1中加入标准品/样品稀释液900ul，第二至第八管中分别加入标准品/样品稀释液200ul，在第一管中加入（1000ng/ml）标准品溶液100ul置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul，移至第二管，如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出200ul弃去，第八管为空白对照。标准曲线浓度为: 100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0 ng/ml（标准品的用量及标准曲线范围也可根据自己需要配置）。

4. 生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟，用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。

5. TMB显色液的配置：使用前10分钟，将TMB显色液A液和B液1：1混合，避光放置备用。

6. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。

检测程序:

1. 加样：空白孔加入50μl标准品/样品稀释液，其余孔各加入标准品或待测样品50ul，将反应板混匀后置37℃，40分钟。

2. 洗板：用1×洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震荡/浸泡1-2分钟，向滤纸上印干。

3. 空白孔加入100ul生物素化抗体稀释液，其余孔各加入1×的生物素化抗体工作液100ul，混匀后置37℃，30分钟。

4. 洗板：同上。

5. 每孔加入SABC复合物工作液100ul，混匀后置37℃，20分钟。

6. 洗板：同上。

7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混匀后置37 ℃暗处反应10-20分钟（具体显色时间根据显色结果而定）。

8. 每孔加入100ul终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果判断与计算：

1. 所有OD值建议减除空白孔值后再进行计算，如空白孔OD低于0.1，也可以直接计算。

2. 以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。

试剂盒性能:

1、 灵敏度:可测浓度小于0.52ng/ml。

2、 特异性:同时可检测重组或天然的大鼠T4，不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。

3、 重复性:板内，板间变异系数均小于10%。

注意事项：

1. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测，每次检测都应做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象，37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3. 检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩余板条需封好，放回袋中1 个月内用完。

4. 试剂盒使用超敏TMB溶液，显色过深时会出现沉淀状，属正常现象，混匀即可，不影响结果判读。

说明书以试剂盒内纸质版为准,本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！