Human ALT ELISA Kit（96T） 

检测原理： 信裕生物生产的 ELISA 试剂盒采用“夹心法”: 将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的 靶蛋白，生物素化的检测抗体与靶蛋白结合， SABC 复合物与生物素化检测抗体结合，形成免疫复合物， 加入 TMB 显色液后，若反应孔中有靶蛋白则显蓝色， 加入终止液变黄色，检测过程中游离的成分均被洗去， 用酶标仪在 450 nm 处测 OD 值，靶蛋白浓度与 OD 值 之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白 的浓度。 

试剂盒组分: （保存温度4℃）  

标本收集与试剂准备:

1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无 内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可）， 血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬 浮物应离心去除，使标本清澈透明。待测样本应 尽早检测，2-8℃保存 48 小时；更长时间须冷冻 （-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。 

2. 洗涤液配置：用蒸馏水 1:20 稀释（例：1ml 浓 缩洗涤液加入 19ml 的蒸馏水） 

3. 标准品配制：取 8 个 1.5ml 离心管，分别标注 S1,S2,S3,S4,S5,S6，S7,blank,第一管 S1 中加 入标准品/样品稀释液 900ul，第二至第八管中 分别加入标准品/样品稀释液 200ul，在第一管 中加入（2000ng/ml）标准品溶液 100ul 置于漩 涡混合器上混匀后用加样器吸出 200ul，移至第 二管，如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出 200ul 弃去，第八管为空白对照。标准曲线浓度 为: 200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 ng/ml （标准品的用量及标准曲线范围也可根据自己 需要配置）。

4. 生物素化抗体工作液配置:使用前 20 分钟，用生 物素化抗体稀释液将 100×生物素化抗体稀释 成 1×工作液，根据所需用量配置，当日使用， 剩余弃之。 

5. TMB 显色液的配置：使用前 10 分钟，将 TMB 显 色液 A 液和 B 液 1：1 混合，避光放置备用。 6. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最 高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍 数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。 

检测程序: 

1. 加样：空白孔加入 50μl 标准品/样品稀释液， 其余孔各加入标准品或待测样品 50ul，将反应 板混匀后置 37℃，40 分钟。 

2. 洗板：用 1×洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次， 每孔加入 1×洗液 350μl，每次震荡/浸泡 1-2 分钟，向滤纸上印干。 

3. 空白孔加入 100ul 生物素化抗体稀释液，其余孔 各加入 1×的生物素化抗体工作液 100ul，混匀 后置 37℃，30 分钟。

4. 洗板：同上。 

5. 每孔加入 SABC 复合物工作液 100ul，混匀后置 37℃，20 分钟。 

6. 洗板：同上。 

7. 每孔加入提前配置好的 TMB 混合液 100ul，混匀 后置 37 ℃暗处反应 10-20 分钟（具体显色时间 根据显色结果而定）。 

8. 每孔加入 100ul 终止液，混匀，30 分钟内用酶 标仪在 450nm 处测吸光值。 

结果判断与计算： 

1. 所有 OD 值建议减除空白孔值后再进行计算，如 空白孔 OD 低于 0.1，也可以直接计算。 

2. 以标准品浓度作横坐标，OD 值作纵坐标，手工 绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品 OD 值计 算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。 

试剂盒性能: 

1、 灵敏度:可测浓度小于 1.2ng/ml。 

2、 特异性:同时可检测重组或天然的人 ALT，不与人 其它细胞因子有交叉反应。 

3、 重复性:板内，板间变异系数均小于 10%。、

注意事项： 

1. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测， 每次检测都应做标准曲线。 

2. 洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致精确度误差 及 OD 值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤 液可能有结晶,属于正常现象，37℃水浴使结晶 完全溶解后再配制洗涤液。 

3. 检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩 余板条需封好，放回袋中 1 个月内用完。 

4. 试剂盒使用超敏 TMB 溶液，显色过深时会出现沉 淀状，属正常现象，混匀即可，不影响结果判读。 

5. 说明书以试剂盒内纸质版为准,本试剂盒仅用于 科研，不能用于临床诊断！