定量PCR(Quantitative PCR, qPCR)，也称实时PCR(Real-time PCR)或者实时定量PCR，是指借助荧光染料或荧光标记的特异性探针，在PCR指数扩增期间实时监测PCR反应体系中的荧光信号强度的变化，从而对目的基因进行定量分析的PCR检测技术。该技术具有特异性强、灵敏度高、污染途径少、检测方法准确等特点，实现了PCR由定性到定量的飞跃，已成为国际公认的核酸定量的标准方法，广泛应用于基因表达丰度、拷贝数等研究及临床疾病检测等许多领域。
上海信裕的定量PCR(Quantitative PCR, qRCR)技术服务是采用SYBR Green I荧光染料法或TaqMan荧光探针法对DNA/RNA进行相对定量或绝对定量。相对定量：通过2^-ΔΔCt法计算比较目的基因和内参基因(常用GAPDH、β-actin和36B4等)的表达倍数差异进行相对定量；绝对定量：需要先制备标准品，然后在检测目的基因的同时检测标准曲线，通过比对标准曲线对未知浓度的样品进行绝对定量，最终计算出样品中特定核酸的拷贝数、摩尔数或者微克数等。上海信裕凭借多年的PCR相关试剂盒，特别qPCR试剂盒的研发经验，拥有专业的技术团队，可以针对客户的不同实验目的设计实验方案，提供DNA、mRNA、长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)水平、非编码小RNA(non-coding small RNA, ncsRNA，包括miRNA、piRNA、siRNA、tRF等)相对定量或绝对定量的检测服务，交付真实准确的原始数据和检测报告。客户仅需提供样品和待检测目的基因的信息，上海信裕提供从样品处理到最终的检测报告的全程服务。客户无需再担心RNA抽提容易降解(免费赠送适量RNALater™动物组织RNA稳定保存液)、qPCR引物设计不佳、操作不熟练致数据波动性大等一系列问题。详细的上海信裕定量PCR技术服务介绍请点击上海信裕定量PCR技术服务介绍 。

定量PCR技术服务项目表

定量PCR技术服务流程

上海信裕定量PCR技术客户须知

1. 样品要求：客户需提供尽量多的新鲜或保存完好的样品：细胞(≥1×10⁶)，组织(≥20 mg)，血液(≥100μl)，DNA样品(≥2μg，OD260/OD280在1.7-1.9之间，完整性好)，RNA样品(≥2 μg，OD260/OD280在1.9-2.1之间，完整性好) ，反转录的cDNA (≥2μg，纯度在1.9-2.1之间，完整性好)。

2. 保存及运输：
   

1. 对于RNA的定量PCR检测：组织或细胞样品推荐使用上海信裕的RNALater™动物组织RNA稳定保存液(R0118)(可免费适量赠送)，以便于后续的保存和运输；组织样品也可以液氮速冻后保存于-80℃，细胞也可以在加入Trizol后保存于-80℃，后续样品需用干冰寄送。样品需要注意避免各类污染和反复冻融。

2. 对于DNA的定量PCR检测：组织或细胞样品推荐使用上海信裕的AllProtect™动物组织核酸、蛋白稳定保存液(R0121)，以便于后续的保存和运输；组织样品也可以液氮速冻后保存于-80℃，细胞也可以收集后直接保存于-80℃，后续样品需用干冰寄送。样品需要注意避免各类污染和反复冻融。

3. 样品信息：客户需提供待检测目的基因的GenBank Accession Number或基因序列。并请尽量提供待检测样品的生物物种信息(如Human、Mouse、Rat等)，组织信息，DNA/RNA来源、基因丰度等，这些信息有助于我们快速完成实验设计并完成定量PCR技术服务。

4. qPCR引物：客户可以提供确保有效的qPCR引物，也可由上海信裕设计合成，但需另外收取费用。

上海信裕定量PCR技术服务承诺

1. 上海信裕承诺提供严谨的实验设计，每个样品三次平行实验，保证实验结果的准确性。

2. 上海信裕交付详细的检测报告(包括实验试剂、材料仪器、软件设置参数、实验方法、结果及分析等)。

3. 上海信裕同时提供RNA或DNA的浓度数据和qPCR的原始数据(包括熔解曲线和扩增曲线)。