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牵牛子PCR鉴定试剂盒
Semen pharbitidis
产品及特点：
它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增牵牛子，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分：
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） |
试剂二 | 超纯水 | 1 mL（亮黄色） |
试剂三 | 牵牛子 PCR鉴定 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
试剂四 | 牵牛子PCR鉴定 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） |
试剂五 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存： 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂： 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 牵牛子PCR鉴定 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：
成份 | N+2 个 样品管 | PCR 阴性 对照 | PCR 阳性 对照 |
PCR Magic Mix 3.0 | 各 20μL | 20μL | 20μL |
牵牛子 PCR鉴定 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
N+2个样品 DNA模板 | 各18μL | -- | -- |
PCR 阴性对照（水） | -- | 18μL | -- |
PCR 阳性对照（牵牛子PCR鉴定阳性对照1000倍稀释液） | -- | -- | 18μL |
4. 按下表设置 PCR 反应：
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 （35 个循环） | 95℃ | 30 sec |
55℃ | 30 sec | |
72℃ | 40 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测：
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。