Klenow Fragment(exo-)

描述：

Klenow 片段（3´→5´ exo-）是 DNA 聚合酶 I 的 N末端截短物，它保留了 DNA 聚合酶活性，但失去了 5´→3´核酸外切酶活性。该酶进一步经突变（D355A，E357A）去除了其 3´→5´的核酸外切酶活性。因此该 DNA 聚合酶无任何外切酶活性，仅包含了 DNA 聚合酶活性，广泛用于标记探针制备、cDNA 第二条链的合成等建库试验。

单位定义 

一个活力单位即在 37°C 条件下，30 分钟内催化 10 nmoldNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

10×Klenow Buffer: 500 mM Tris-HCl (pH 8.0 at 25 °C), 50mM MgCl2, 10 mM DTT. 该酶兼容 PCR Buffer 和内切酶Buffer。

应用： 

（1）用随机引物制备探针 

（2）随机引物法标记（3）cDNA 第二条链的合成 

（4）该酶不能用于产物平端不齐

失活：75°C，20min 失活。

储存：-20℃可保存 3 年。

随机引物生物素标记反应 

1. 按以下组分配制反应液

95°C 5min 冰上放置 5min。 

2. 聚合反应 

加入 1 μl Klenow Fragment(exo-)，混合均匀。37°C 反应 15min，75°C 20min 失活。

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