Poly(A)聚合酶 (E.coli)
描述:
本 E. coli Poly(A) Polymerase 为高效加 A 聚合酶,该酶以RNA为模板在RNA的3′末端加入20~200个A碱基。可应用于增强 mRNA 的稳定性,及 microRNA 加 A 尾,为cDNA 合成提供 oligo-dT 引物结合位点等。该酶以单链 RNA作为引物,ATP 作为底物进行聚合反应。
活性定义:
在 37℃、pH7.9 的条件下,以 ATP 为底物,10 分钟内把1 nmol 的 AMP 聚合到 RNA 上所需要的酶量定义为 1 个活性单位(U)。
应用:
♦ RNA 3' 标记
♦ microRNA 加 A 尾,为 cDNA 合成提供 oligo-dT 引物结合位点
♦ 增强 RNA 稳定性
储存:
-20°C 可保存 2 年。
热失活条件:
65°C 20 min
操作方法:
1. 按以下组分配制反应体系
2. 混合均匀后,37°C 反应 1 小时。即可用于后续实验。
注:不同的实验需要加 A 的量会有所不同,可通过减少反应时间来调整加 A 的长度,该酶在 37°C 反应 30 分钟时可加30 个 A 碱基,1 小时可加 100 个 A 碱基。
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