耐热反转录酶 ThermoStable V Reverse Transcriptase
描述:
ThermoStable V Reverse Transcriptase 反转录酶是在鼠源病毒反转录酶基础上进行定点突变改良而得。该酶去除了 RNase H 活性中,从而避免反转录过程中降解 RNA。同时经过突变文库筛选,使得其热稳定性更强,可耐受 65℃高温反应。相比于低温条件下反转录反应,采用高温反转录可显著打开 RNA 二级结构,从而提高复杂 RNA模板的扩增性能、提高反转录 cDNA 的长度和产量,从而提高后续检测的灵敏度。
单位定义:以 poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物,在 37°C条件下,10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为一个活性单位。
储存:-20°C 可保存 3 年。
操作方法
1. 按以下组分配制反应体系
*注:Oligo dT(25) 使用浓度为 20~50 μM, 如使用 Random9
随机引物可使用 125 μM,基因特异性引物可使用 5 μM。
2.在 PCR 仪上按下列条件进行反转录反应
*通常反转录温度设置为 50°C,无论是高 GC 或长片段模板,均可获得综合性的 cDNA 产量。在采用 65°C 反应条件时可显著提高>75%GC 含量的 cDNA 产物。
3. 反转录所得的 cDNA 可直接用于 PCR 反应或储存于-20°C。
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