HiFi One-Step RT-PCR Mix

描述：

本试剂采用稳定高效的 RT-PCR 预混体系，是以 RNA为模板进行一步法 RT-PCR 的专用试剂。其原理为用基因特异性引物进行反转录反应，获得第一链 cDNA（不可使用Oligo（dT）或 Random Rimer 合成第一链 cDNA），再使用基因特异性正向引物和反向引物进行 PCR 扩增，在同一反应体系中一步完成从反转录到 PCR 的全部过程。反应体系中已含有电泳所需的指试剂（蓝色和黄色），反应后可以直接进行电泳。 

在本试剂盒中，将耐热 M-MLV 反转录酶、Rnase Inhibitor、Hotstart 高 保 真 DNA 聚合酶以及稳定剂等配制成50×One-Step Enzyme Mix 预混液；反应 Buffer、dNTP 以及电泳指示染料配制成 5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer，因此使得操作更加简单便，扩增产物可用于平端克隆和 DNA 测序。

主要优势： 

耐热M-MLV反转录酶可在55℃反应能更好的打开复杂二级结构，只需 10min 即可完成逆转录。 

DNA 聚合酶为热启动型高保真酶，能够有效的抑制非特异性反应且具有较高的校正活性，酶激活仅需 2min。 

具有宽泛的模板量兼容性，10 ng~1μg 都可有效扩增。 

反应过程中无需开盖，避免了操作过程中的污染危害。

储存：请置于-20°C，可保存 2 年；避免反复冻融。 

注意：1.50×One-Step Enzyme Mix 粘度高，第一次使用之前要离心收集至反应管底部，吸取时应缓慢小心。 

2.由于使用了 Hotstart 高保真 DNA 聚合酶，反应配制可在常温进行，但各组分应-20°C 保存。

实验操作和反应条件： 

1. 按以下组分配制反应液

注意：超过 1 μg 的 RNA 模板量会抑制 PCR 反应，建议第一次可使用 200 ng 的 RNA 模板，然后根据结果进行优化。 

2. 在 PCR 仪上按以下条件进行 RT-PCR 反应:

3. PCR 反应结束后，可取 5 μl 产物直接进行电泳检测。预混液中已经包含绿色染料，无需再加入 DNA Loading Buffer。1% Agarose 电泳时，蓝色指示剂指示 3~5 kb，黄色指示剂指示 <50 bp。

仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。