T4 DNA 连接酶
描述:
T4 DNA Ligase 可催化相邻 DNA 链的 5’-P 末端和3’-OH 末端以磷酸二酯键结合的反应,需 ATP 作辅酶,不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的 DNA 的连接,也可以催化 DNA 与 RNA 之间以及少数 RNA 之间的连接。可应用于在粘性末端或平末端连接双链 DNA 分子,也可应用于修补双链 DNA、RNA 或 DNA RNA 杂交体上的缺口。
活性定义:在 20 μl 连接反应体系、0.12 μM(300μg/ml)的 5’-末端浓度条件下,16°C 反应 30 分钟,能使 50%HindIII消化的 λDNA 片段连接所需的酶量定义为一个活性单位。
应用:PCR 扩增、3’端加尾、DNA 测序
储存:-20°C 可保存 2 年。
操作方法
1. 按以下组分配制反应体系
2. 如为粘末端连接反应,16°C 连接 3 小时,或 4°C 连接过夜;连接产物直接用于转化(或冻存于-20°C)。
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