T5核酸外切酶
描述:
T5 核酸外切酶沿 5’-3’方向降解 DNA,它可降解双链DNA、单链 DNA 和缺刻的质粒 DNA。它既能从 5’-末端起始降解 DNA,也能从线性或环状双链 DNA 的切刻或缺口处起始降解 DNA,但不能降解超螺旋双链 DNA。基于以上特性,T5 核酸外切酶可应用于 Gibson 组装。
储存:-20℃可保存 3 年。活性定义:1 单位指在 50 μl 反应体系,37°C 条件下,30分钟内能从双链 DNA 底物上催化产生 1 nmol 的酸可溶性脱氧核糖核苷酸所需要的酶量。
使用注意事项:
(1)1×T5 Exo Buffer:50mM KAc,20mM Tris-Ac pH 7.9,10mM Mg(Ac)2,1mM DTT。该酶在 PCR Buffer 中也具有活性。
(2)该酶的最佳反应温度为 37°C,在 50°C 也具有一定活性,因此可用于 Gibson 组装。
使用方法:
1.建立如下反应体系
2. 37°C,30min。
3. 加入 EDTA 至总浓度为 11mM,终止反应。
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