Exonuclease III
描述:
核酸外切酶 III 来源于 E.coli,具有 3´-5´外切酶活性,它作用于双链 DNA,从 3´ OH 末端方向逐步切去单核苷酸;每次酶与底物结合催化,只有几个核苷酸被除掉,从而在 DNA 分子群内产生渐进缺失。该酶的最佳底物为平末端、5´突出末端双链 DNA 分子,但也可作用于双链 DNA 的缺刻处,从 3´降解 DNA 分子,释放 5´单核苷酸。对于 3´突出末端,尤其是多于 4nt 的几乎完全不切割, 亦不能切割硫代磷酰脂键。核酸外切酶 III 的活性部分依赖螺旋结构,并根据序列的不同而有差异(C>A=T>G)。另外,核酸外切酶 III 还具有脱嘌呤/嘧啶-核酸内切酶活性、RnaseH 活性和 3´磷酸酶活性。
活性定义:50 μl 反应体系中,37℃ 条件下,30 分钟催化 E.coli DNA 产生 1 nmol 酸可溶性产物所需要的量定义为一个活性单位。
应用: 非定向巢式缺失 定点突变 链特异性探针的制备 制备用于双脱氧测序的单链底模板
热失活:70°C,20min。1X Exonuclease III Buffer: 10 mM Bis-Tris(pH 7.0),10mM MgCl2,1 mM DTT。
酶储存液:50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mMDTT, 50% Glycerol.
储存:置于-20°C 可保存 2 年,避免反复冻融。
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