裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒

产品及特点 本酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，高效快速制备裂殖酵母化学感受态细胞、用于长期冻存以备后续转化的产品。它具有下列特点：
1. 一次制备，-80℃保存，多次使用，免去每次转化都要制备裂殖酵母感受态细胞。

2. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要 30 分钟

3. 只能用于裂殖酵母 S. pombe。
4. 受体酵母可以不含质粒，也可用于携带有选择性质粒的酵母（如双杂交体系中的酵母）。
5. 最高转化效率可达到 2×10E6 个转化子/ug 质粒 DNA。
6. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒 DNA 进行转化，例如 YIp, YRp, YCp, YEp 和 YAC 等。
7. 可以用于酵母双杂交、定点突变（Site－Directed Mutagenesis）、基因破坏（Gene Disruption）、等位突变基因修复（Mutant Allele Recovery）等实验。

8. 本产品可以制备 20 只酵母感受态细胞和进行 20 次高效转化。

规格及成分

自备试剂 100 mL SLD 培养基，无菌水，1.5mL 无菌的塑料离心管
运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。

使用方法

一：准备工作
制备前需要将自备的无菌水防冰上预冷。需要制备 100mL SLD 液体培养基（含0.67g 的 Bacto Yeast Nitrogen Base 和 0.5g 葡萄糖）。如果酵母含有氨基酸缺陷型，还需要补充相应的氨基酸到终浓度为 150ug/mL。否则酵母不会生长。
二：裂殖酵母化学感受态细胞的制备
说明：50 mL 培养基可以制备 10 只感受态细胞，下面的操作以此为例子。用户如果需要制备其他的数量的感受态细胞，所用试剂和操作需要相应改动。
1. 挑取新鲜的裂殖酵母单菌落（4℃放置不超过 3 周的也可以），接种到装在50 mL 自备的 SLD 培养基中（在玻璃三角瓶中）。
2. 30℃摇晃培养，摇床速度 250 rpm/分钟，直到 OD600 达到 1.0（相当于1×10E7 细胞/mL）。
3. 将培养三角瓶放置在冰上 15 分钟。
4. 室温 1600 rpm 离心 5 min，弃上清得裂殖酵母细胞沉淀。
5. 加入 50 mL 在用冰上预冷的无菌水，轻柔重悬裂殖酵母细胞沉淀，再在常温 1600 rpm 离心 5 min，弃上清。
6. 再重复上步（洗涤步）两次。
7. 加入相当于培养基 1/100 的裂殖酵母化学感受态制备液（此处是 50mL 培养基，故加入裂殖酵母化学感受态制备液 0.5mL）。
8. 重悬细胞沉淀。此时细胞的浓度为 1×10E9 细胞/mL。
9. 将细胞分装到 1.5mL 无菌的塑料离心管中，每管 50uL。
10. 将装有细胞的离心管在冰上放置 30 分钟后再转移到-80℃长期放置待用。
三：化学转化裂殖酵母感受态细胞
11. 从-80℃取出装有 50uL 裂殖酵母感受态细胞的离心管，40℃水浴放置 2 分钟。
12. 在融化的细胞中加入代转化的质粒 DNA 和 150 uL 裂殖酵母转化液，轻柔吹打混匀。
13. 防 43℃水浴或金属浴 15 分钟。
14. 取部分转化后的细胞涂盘，或加入 0.8mL TE 缓冲液（pH7.5）稀释转化的细胞，轻柔混匀后取 100uL 涂盘到适当的固体选择培养基。
15. 30℃培养 3-5 天后即得酵母转化菌落。

仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。