柱式软体RNA提取试剂盒（柱式软体RNAout）

产品及特点
本产品专门从各种软体组织样品中快速提取总RNA的试剂盒，它能有效克服传统TRIzol方法提取软体组织 RNA时,十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。本产品具有下列特点:
1.适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的软体动物，包括螺类、贝类、乌贼、章鱼和蜗牛等。

2．能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染，OD260/280一般均在1.9以上。

3. RNA产率一般为5-15 ug/ 100 mg。

4.操作简单，整个提取过程一般只需要10多分钟。

5.得到的RNA可以直接用于RT-PCR,Northern杂交、mRNA纯化、PrimerExtension、RNA Protection、in vitro translation等研究。

规格及成分

运输及保存│常温运输，4℃保存，有效期一年。

自备试剂氯仿。

使用方法|

1．先将50-200 mg新鲜或冷冻的软体组织液氮研磨成粉，加入 1 mL溶液A溶解（溶液A使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并摇晃混匀)，然后将研磨物转移到新的1.5 mL离心管中，振荡混合30秒。也可以将软体组织剪碎后与溶液A一起用Polytron匀浆机(内切式匀浆机)勾浆5-20秒，再转移到1.5 mL离心管中。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
2．在离心管中加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3.室温12000-15000g离心3-5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
4.将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蚩白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100 uL上清液不取。

5．加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
6．将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000-15000 g室温离心半分钟，弃穿透液。
7．将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
8.加0.7 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。

9.加0.3 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。

10.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。

11.将离心吸附柱转移到自备的RNase-free离心管中,加入50-100 uL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。

12.12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13.RNA完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28: 414，2000)。
14.RNA产量产率测定:将5-10 uL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之
间)检测其在OD260的光吸收.通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40 ug/mL),进而计算出RNA 的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。注意:测定OD时不要稀释过度，否则浓度会在仪器能测的范围之外。本方法提取的RNA测OD时一般最多只能稀释10-20倍。

15RNA纯度测定:无污染的总RNA 的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。