柱式病毒RNA提取试剂盒（柱式病毒RNAout）

产品及特点 本产品是在基因一管式病毒 RNAOUT 的基础上开发的、专门用于 从血清(血浆)等液体样品中提取微量病毒 RNA 的产品，它具有下列特点：

1. 操作简单，整个过程只需要 20 分钟左右，不需要额外在洗柱液中补加 乙醇。

2. 灵敏度高，通过 RT-PCR 检测到的最终灵敏度可以达到 50 拷贝/mL。

3. 安全无毒，不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。

4. 如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理 1.5 mL 液体病毒样品。

5. 与 RT-PCR 和荧光 RT-PCR 兼容。

6. 价廉物美，性价比远低于国外同类产品。

7. 适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞 上清液等无细胞材料。

规格及成分：

运输及保存 常温运输和保存，RNA 病毒裂解液长期（1 周）放置需放 4℃，有效期一 年。

自备试剂 无

使用方法

1. 如果有 N 个样品，标记 N+2 个 1.5-2 mL 螺旋盖塑料离心管，多出的一个为阳性对照，一个为阴性 对照。为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做 个标记，以在后续操作时区别向心面和离心面。然后各加入 0.2 mL 液体样品（血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等等）。 1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各种拭子样品，则将拭子放入 0.2mL 自备生理盐水中挤压出液体，然后取 0.2mL 进行提取。 1.2、 如果是粪便等半固定样品，则取约 0.3mL 的样品，加入 0,3 自备生理盐水，震荡重悬，离心取 0.2mL 上清进行提取。 1.3、 如果血液，细胞培养液等含细胞的液体，可以离心用上清，也 可以直接取用，但后者提取的 RNA 中有细胞的基因组 DNA 污 染。血浆的抗凝剂必须是 EDTA 或 ACD，不能是肝素。使用 ACD 时由于所加入 ACD 会增加体积，样品会被稀释，得到的 病毒滴度会比使用 EDTA 低 15%左右。血浆最好按 0.6mL/ 管的量分装保存，以避免反复冻融。 1.4、 如果样品是实体组织或培养细胞，则需要在自备生理盐水中匀 浆后离心，用 0.2mL 上清液（含病毒）进行提取，但此种情 况下最后得到的 RNA 不可避免的会含有基因组 DNA 污染。 1.5、 如果液体样品中的病毒需要富集，可以使用 1.5 mL 上述方法 得到的液体在 4℃ 24,000 g 冷冻离心 60 分钟, 移弃 1.3 mL、 用剩下的 0.2mL 继续操作。

2. 加入 0.6 mL RNA 病毒裂解液，振荡 30 秒混匀后室温放置 10 分钟。 注意：RNA 病毒裂解液在 4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放 在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

3. 加入 0.8mL 上柱结合液到离心管中，颠倒混匀后转移一半的混合液 （0.8 mL）到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟。

4. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱 放回到收集管中。

5. 将剩余的另外一半裂解液（0.8mL）转移到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟。

6. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱 放回到收集管中。

7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。

8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。此为第 二次洗涤，可以跳过。

9. 12000 g 室温离心半分钟。

10. 在离心吸附柱的滤膜的中部加入 30-100 uL RNA 洗脱液，然后将离 心吸附柱套入一新的 1.5 mL 离心管中，室温放置 2 分钟。

11. 12000 g 室温离心 1 分钟，离心管中收集的样品即为 RNA。

12. RNA 样品可以直接用于 RT-PCR 或逆转录反应，也可放-80℃长期保 存。 注：病毒提取的核酸量远不足以电泳检测，提取后可通过 RT-PCR 检 测，最终灵敏度可以达到 50 拷贝/mL。

相关资料

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