柱式血清/血浆游离DNA提取试剂盒（柱式血清/血浆游离DNAout）（cfDNA）

产品及特点 本产品是基于离心柱层析法，用于从血浆/血清中方便、快速、可靠地提取游离循环 DNA（circulating DNA、cell-free DNA，cfDNA）。本产品可用于从新鲜或冷冻血浆/血清样品中分离各种大小的 cfDNA，它具有下列特点：
1. 操作简单，整个过程只需要 20 分钟左右。
2. 不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
3. 安全无毒，不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
4. 与 PCR 和荧光 PCR 兼容。
5. 可在 30 μL~100 μL 范围内灵活调节洗脱体积浓缩循环 DNA。

6. 适用于各种血清和血浆。

规格及成分

运输及保存 常温运输及保存，柱式血清/血浆游离 DNA 溶液 A 长期（1 月以上）放置时需要放 4℃。 有效期一年。 

自备试剂 无，但需要自备 RNase-free 的 1.5 mL 离心管（耗材）。

使用方法

1. 如果有 N 个样品，标记 N+2 个 1.5-2 mL 螺旋盖塑料离心管，多出的一个为阳性对照（PC），一个为阴性对照（NC）。为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做个标记，以在后续操作时区别向心面和离心面。然后在离心管中分别加入 0.2 mL 血清或血浆，在PC 管中加入已经确认有阳性 DNA 的血清或血浆，在 NC 管中加入已经确认没有阳性 DNA 的血清或血浆。
2. 加入 0.6 mL 柱式血清/血浆游离 DNA 到各离心管中，振荡 30 秒混匀后室温放置 10 分钟。注意：柱式血清/血浆游离 DNA 溶液 A 在 4℃放置后可能会产生结晶，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 加入 0.8mL 上柱结合液到离心管中，颠倒混匀后转移一半的混合液（0.8mL）到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟。
4. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
5. 将剩余的另外一半裂解液（0.8mL）转移到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟。
6. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。此为第二次洗涤，可以跳过。
9. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟（干甩），弃含穿透液的离心管。
10. 将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的 1.5 mL 离心管中，在离心吸附柱的滤膜的中部加入 30uL DNA 洗脱液 3.0，然后室温放置 2 分钟。
11. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，离心管中的溶液即为游离 DNA 溶液。
12. DNA 样品可以直接用于 PCR，也可放-20℃长期保存。 
使用方法 

1. 如果有 N 个样品，标记 N+2 个 1.5-2 mL 螺旋盖塑料离心管，多出的一个为阳性对照（PC），一个为阴性对照（NC）。 为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做个标记，以在后续 操作时区别向心面和离心面。然后在离心管中分别加入 0.2 mL 血清或血浆，在 PC 管中加入已经确认有阳性 DNA 的血清或血浆，在 NC 管中加入已经确认没有 阳性 DNA 的血清或血浆。 

2. 加入 0.6 mL 柱式血清/血浆游离 DNA 到各离心管中，振荡 30 秒混匀后室温放 置 10 分钟。注意：柱式血清/血浆游离 DNA 溶液 A 在 4℃放置后可能会产生结 晶，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。 

3. 加入 0.8mL 上柱结合液到离心管中，颠倒混匀后转移一半的混合液（0.8mL） 到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟。 

4. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集 管中。 

5. 将剩余的另外一半裂解液（0.8mL）转移到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟。 

6. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集 管中。 

7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp 室温离心 1 分钟，弃收 集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。 

8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp 室温离心 1 分钟，弃收 集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。此为第二次洗涤，可以跳过。 

9. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟（干甩），弃含穿透液的离心管。 

10. 将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的 1.5 mL 离心管中，在离心吸附柱的滤 膜的中部加入 30uL DNA 洗脱液 3.0，然后室温放置 2 分钟。 

11. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，离心管中的溶液即为游离 DNA 溶液。 

12. DNA 样品可以直接用于 PCR，也可放-20℃长期保存。

仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。