柱式海洋动物DNA提取试剂盒（柱式海洋动物DNAout）

产品及特点 本产品是在柱式动物 DNAout试剂盒基础上优化改良而得，专门针对海洋动物的基因组 DNA 提取的试剂盒，可用于鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物和水产动物的荃因组 DNA 提取，可以有效去除海洋动物组织中的蛋白、脂肪及其他有机化合物等杂质。本产品主要特点是:
1. 使用本试剂盒提取的基因组 DNA 可适用于各种常规分子生物学操作，如:酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等试验。
2. 操作简单安全，1 小时内即可获得超纯的基因组 DNA，纯化过程中不需要使用苯酚氯仿等有机试剂。
3. 应用广泛，适用于多种动物细胞和动物组织等。

4. 性价比高，质量和国外同类试剂盒相当，价格更低。

规格及成分

运输及保存 常温运输和保存，但蛋白酶 K 溶液(20 mg/mL)需要低温运输，-20℃保存， 有效期一年。

自备试剂 无水乙醇、RNase A 溶液（100mg/mL）

使用方法 注意：使用前请先在柱式海洋动物 DNAout 溶液 C 中加入 17mL 自备的无水
乙醇，在专用洗柱液中加入 60mL 的自备无水乙醇。

1. 切取不多于 30 mg 的海洋动物组织材料，放入装有 200 μL 柱式海洋动物 DNAout 溶液 A 的离心管中，涡旋振荡 15 秒。注意：根据提取的组织不同，起始量也稍有不同，腮的细胞量较大，一般建议提取量不超过20 mg。如果需要去除 RNA，可加入 40 μL RNase A（10 mg/mL）溶液，振荡 15 秒，室温放置 5 分钟。

2. 加入 20μL 蛋白酶 K 溶液(20 mg/mL)，涡旋混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。在 56℃下放置，直至海洋动物组织完全溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。注意：不同动物组织裂解时间不同，通常需 0.5-2 小时即可完成。扇贝组织 0.5 小时基本可裂解完全，虾和鱼类组织 1 小时。每小时振荡混合样品 2-3 次，每次振荡混匀 15秒。
3. 加入 200μL 柱式海洋动物 DNAout 溶液 B，充分颠倒混匀，70℃放置10 分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入柱式海洋动物 DNAout 溶液 B 时可能会产生白色沉淀，一般 70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不纯。
4. 在混合液中加入 200μL 无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个硅胶膜离心吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm（~13,400×g）离心 30 秒，倒掉废液，将吸附柱放回收集管中。
6. 向离心吸附柱中加入 500 μL 柱式海洋动物 DNAout 溶液 C，13,000rpm（~13,400×g）离心 30 秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。
7. 向吸附柱中加入 600 μL 专用洗柱液，12,000 rpm（~13,400×g）离心 30 秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。

8. 重复上步操作一次。
9. 将硅胶膜吸附柱放回收集管中，12,000 rpm（~13,400×g）离心 2 分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的专用洗柱液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的专用洗柱液去除，否则其中的乙醇残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。
10. 将硅胶膜离心吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200 μL 专用 DNA 洗脱液，室温放置 2-5 分钟，12,000 rpm（~13,400×g）离心 1 分钟，将溶液收集到离心管中。注意：专用 DNA洗脱液的体积不应少于 50 μL，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置 2 分钟，12,000 rpm（~13,400×g）离心 1 分钟。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用超纯水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；且 DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA降解。

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