一步法大提质粒DNA提取试剂盒（一步法大提质粒DNAout）

产品及特点 本产品是在基因一步法质粒 DNAOUT 2.0基础上开 发的、能够快速从 100 mL 左右的 E.coli 培养液中取质粒 DNA 的产品。它只 需要一种溶液即可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒 DNA。 它比经典的碱变性质粒制备方法更加快捷和方便。本产品的主要特点是：

1 . 快速，整个质粒 DNA 提取过程只需要不到 30 分钟，比传统的碱变性 方法快捷。

2. 超螺旋比例高，独创的非碱法一步式细菌裂解技术，避免了强碱对 DNA 的损害，得到的质粒 DNA 切口更少。

3. DNA 纯度高，几乎没有基因组 DNA 和 RNA 污染，OD260/280 一 般在 1.7-1.9 之间。

4. DNA 可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。

5. 最大吸附量为 600 ug DNA，具体产率取决于质粒拷贝数。 6. 过程简单，重复性和稳定性好。

规格及成分：

运输及保存 常温运输及保存（溶液 A 需要 4℃保存），有效期一年。

自备试剂 无

使用方法

1. 用 50 mL 离心管分数次收集 10-60 mL 新鲜的菌液，一般可以 5000 rpm 离心 10 分钟，去除上清即得细菌沉淀。

2. 往细菌沉淀中加入 14 mL 溶液 A，充分振荡悬浮或吹打混匀。注意：充分 重悬细胞沉淀（无块状物）对于获得高的质粒产量十分重要。

3. 将裂解液全部转移到大离心吸附柱中，放入到配套的收集管中。

4. 6000 rpm 离心 5-10 分钟，弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒 DNA，而将基因组 DNA 和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离 心下去的裂解液，可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。

5. 将 10mL 通用预洗液加入到离心吸附柱中，室温静置 2 分钟后 6000 rpm 离心 5 分钟，弃穿透液。

6. 重复上步一次。

7. 将 10mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置 2 分钟后 6000 rpm 离心 5 分钟，弃穿透液。

8. 重复上步一次。

9. 室温 6000 rpm 空甩 5 分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过。

10.将离心吸附柱放入一个自备的、干净的 50 mL 塑料离心管中，加 1 mL 通 用洗脱液（洗脱液如加热到 50-65℃效果更佳），室温静置 2 分钟后 6000 rpm 离心 5 分钟，收集液即是质粒 DNA 溶液。

11.重复上步 1 次以便洗脱更多的质粒 DNA。

12.合并所得质粒 DNA，立即使用或-20℃储存。

仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。