柱式土壤DNA提取试剂盒（柱式土壤DNAout）

产品及特点 本产品是本公司土壤 DNAOUT的柱式升级产品，专门用于从 各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的 DNA 的试剂。跟土壤 DNAOUT 相比它 具有下列特点：

1. 去污染效果更好，得到的 DNA 可以直接作为 PCR 模板或酶切，不需要再进行 去腐殖酸处理。

2. 操作过程更加简单快速，整个操作只需要 10 多分钟，扩容性好。

3. 产量高，每克土壤一般可以提取到 5-50 ug DNA，片段长度在 20-50 Kb， OD260/280 一般都在 1.8 以上。

4. 适合于各种土壤（包括河海沉积物）。

规格及成分：

运输及保存 常温运输及保存，保存期为一年。

自备试剂 氯仿。

使用方法

1. 65℃预热柱式土壤 DNAout 溶液 A，待其沉淀溶化后充分混匀，取 0.5 mL 加 入到 1.5 mL 塑料离心管中并放置于 65℃待用。

2. 称取 0.1-0.3 g 的土壤，加入到装有预热的柱式土壤 DNAout 溶液 A 的离心管 中，震荡器上剧烈震荡 5-10 分钟。如果是扩量操作，可以使用更多土壤和较 大离心管。也可以将同一种土壤在较大离心管中震荡处理，然后再分到 1.5 mL 离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的土壤震荡起来。

3. 将离心管置于 65℃水浴中保温至少 5 分钟。

4. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈 淡黄色或深棕色，实际颜色取决于腐殖酸的含量，上清液的体积一般为 300-400 µL)。

5. 在上清液中加入等体积的柱式土壤 DNAout 溶液 B，上下颠倒 30 秒充分混匀， 溶液将呈白色或淡黄色混浊状。

6. 将离心管冰浴至少 5 分钟。

7. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，转移上清到新的 1.5 mL 离心管中，上清 液颜色将比第 4 步得到的上清的颜色稍淡，体积在 0.7 mL 左右。 注意：下面第 8-第 9 步的氯仿抽提操作可以省略，直接进入第 10 步，但 DNA 的 产量会低 50%左右，OD260/280 在 1.7-1.8。如果直接进入第 10 步，则转移的 溶液体积不要超过 0.6 mL，否则没有空间加 A 型通用上柱液。

8. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡 30 秒混匀。注意:一定要让管底 的溶液震荡起来。

9. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心 后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。上 清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。将上清转移到新的 1.5 mL 离心管时， 不要超过 0.6 mL，否则没有空间加溶液 C。如果有多余的可以弃之不用。

10. 加入 1.5 倍体积的 A 型通用上柱液，上下颠倒 30 秒混匀。

11. 分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温 离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液）。

12. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃 穿透液。

13. 再加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟， 弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的 DNA 的纯度稍有提高。

14. 12000-15000 g 室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液 会污染 DNA。

15. 将离心吸附柱转移到一新的 1.5 mL 塑料离心管中，加入 50uL DNA 洗脱液 2.0。

16. 室温放置离心吸附柱 1-2 分钟。

17. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为提取到的 DNA 样品，可 以立即使用或存放于冰箱待用。

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