基本原理 :
荧光素标记蛋白(FA)是目前广泛用于免疫病理.细胞化学.流式细胞学.病理学及自身蛋白的临床免疫中的特异.灵敏.定性和定位相结合的免疫化学试剂。在碱性缓冲液条件下,Cy5与蛋白的自由氨基结合,形成带有荧光素标记的蛋白。
材料:
样品:dCTP化合物,100mM
Cy5荧光素购于sigma公司,Ex=552nm,Em=570nm
方法:
取1mgdCTP化合物(21.4ul),然后用0.1M NaHCO3(PH9.5)调PH值至PH9.0,再与等摩尔数的Cy5混合连接,加入50ul 1M Tris缓冲液封闭结合游离的Cy3荧光分子。12000转/分高速离心取上清。
提供:
dCTP-Cy5:浓度10mM,体积25ul。
保存:
-20℃,避光保存。
注意:
使用前请离心,避免粘附在管壁或瓶盖上的试剂造成的浪费。