2×GS Antitaq PCR Mix
产品组成
组分 | 规格 |
2×GS Antitaq PCR Mix | 5×1.0 mL |
保存条件
-20℃保存 24 个月。
产品简介
本产品包含抗体修饰的热启动GS Antitaq DNA聚合酶、dNTPs以及优化的缓冲体系,浓度为2×, 只需要添加引物、模板和ddH2O即可进行PCR扩增。
使用本产品扩增的PCR产物3’端带有一个突出的"A"碱基,纯化后可直接用于TA克隆。
产品特点
操作简单:2×Mix,只需要添加引物、模板和ddH2O即可进行PCR扩增;
适用范围
适用于常规PCR、热启动PCR。
注意事项
1. 请使用高质量的模板进行扩增;
2. PCR Mix应避免反复冻融,短期内多次使用可置于4℃保存。
使用方法
操作示例
按下表配制 PCR 反应体系(冰上操作)
组分 | 25 μL 体系 | 50 μL 体系 | 终浓度 |
2×GS Antitaq PCR Mix | 12.5 μL | 25 μL | 1× |
Primer 1 (10 μM) | 0.5 μL | 1.0 μL | 0.2 μM |
Primer 2 (10 μM) | 0.5 μ | 1.0 μL | 0.2 μM |
Template DNA* | As require | As require | |
ddH2O | Up to 25 μL | Up to 50 μL |
*模板推荐量:
基因组DNA:10~1000 ng;
质粒DNA:1~30 ng;
cDNA:1~2 μL(不超过PCR反应总体积的1/10)。
(以上为推荐的模板使用量,实际反应条件因模板、引物等的结构不同会存在一些差异,可根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系。)
建议的 PCR 条件
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 2~5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 30 s | 30~35 cycles |
退火 | 50~68℃ | 30 s | |
延伸 | 72℃ | 1~2 kb/min | |
终延伸 | 72℃ | 5~10 min | 1 |
- | 4℃ | Hold | - |
常见问题与解决办法
Q1:扩增无产物或产物量少?
A1:
1) 模板降解或模板纯度差。电泳检测模板质量,使用高质量模板;
2) 模板浓度过低。适当增加模板用量;
3) 引物不合适。优化引物设计;
4) 退火温度不合适。设置退火温度梯度,摸索合适的退火温度;
5) 循环数过少。适当增加 5~10 个循环;
6) 延伸时间不足。复杂模板可适当增加延伸速度至 20~30 s/kb。
Q2:扩增出现非特异条带或弥散带?
A2:
1) 引物特异性差。优化引物,避免非特异性条带以及引物二聚体的扩增;
2) 引物浓度过高。降低引物浓度;
3) 模板过量或纯度差。减少模板量,使用高质量模板;
4) 退火温度过低。适当提高退火温度或使用 Touchdown PCR 程序;
5) 循环数过多。减少循环数至 25~30 cycles。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。