Triumfi Mouse Tissue Direct PCR Kit

产品组成

保存条件

Lysis Buffer 2~8℃、其余组分-20℃保存 24 个月。

产品简介

本产品是一款专为小鼠基因型快速鉴定设计的试剂盒，包含 DNA 粗提取及 PCR 扩增体系。本产品可直接利用小鼠尾巴、耳朵、脚趾等组织经 Lysis Buffer、Proteinase k 简单裂解处理后进行 PCR 扩增，无需过夜消化、酚氯仿抽提或柱式纯化等操作，使用简便，极大缩短实验耗时。产品适用于 2 kb以内目的片段的扩增以及 3 对引物以内的多重 PCR 反应。

本产品所提供的 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix 中，包含经过基因工程改造的 DNA 聚合酶、Mg2⁺、dNTPs 及优化的缓冲体系，具有极高的扩增效率和抑制物耐受度，使用时只需加入模板和引物，并补水至 1×即可进行 PCR 反应，使用本产品扩增的 PCR 产物 3’端带有一个突出的"A"碱基，纯化后可直接用于 TA 克隆。

产品特点

操作简便：无需提取基因组 DNA；

适用广泛：适用于多种小鼠组织的直接扩增。

适用范围

本产品适用于小鼠基因敲除分析、转基因检测、基因分型等。

注意事项

1. 为了避免样品间出现交叉污染，需准备多个取样工具，如需反复使用可在每次取样后用 2%次氯酸钠溶液或核酸清洁剂对工具表面进行清洁；

2. 建议使用新鲜采取的小鼠组织，取样量不宜过大，以避免影响扩增结果；

3. Lysis Buffer 的保存条件为 2~8℃，若低温保存可能会出现沉淀，在使用前务必充分溶解；

4. PCR Mix 应避免反复冻融，短期内多次使用可置于 4℃保存。

使用方法

操作示例

1. 基因组 DNA 的释放

1) 裂解液配制

根据需要裂解的小鼠样品数量配制组织裂解液（组织裂解液应现用现配，且充分混匀后使用），单个样品所需试剂比例如下：

2) 样品准备与裂解

推荐组织使用量：

取适量小鼠组织样品于干净的离心管中，向每个离心管中加入 200 μL 新鲜的组织裂解液，涡旋震荡后在55℃下孵育 30 min，然后 98℃加热处理 3 min。

3) 离心

将裂解产物充分震荡混匀，12,000 rpm 离心 5 min，上清液可作为模板直接用于 PCR 扩增。模板如需保存，可将上清液转移至另一个无菌离心管中，并置于-20℃保存，保存时间为 2 周。

2. PCR 扩增

将 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix 从-20℃取出后置于冰上解冻，上下颠倒混匀后按下表配制PCR反应体系（冰上操作）：

*加入量不应超过体系的 1/10，加入量过高时，可能会抑制 PCR 扩增。

建议的 PCR 条件

*退火温度：参考引物 Tm 值，建议退火温度设置为引物中 Tm 较小值+3~5℃；

常见问题与解决办法

Q1：无目的条带？

A1：

1) 裂解产物过量。选择最合适的模板用量，一般不超过体系的 1/10；

2) 取样量过大。将裂解产物稀释 10 倍后扩增，或减少取样量重新裂解；

3) 组织样品不新鲜。建议使用新鲜的组织样品；

4) 引物质量差。使用基因组 DNA 进行扩增验证引物质量，优化引物设计。

Q2：出现非特异扩增？

A2：

1) 退火温度过低、循环数过高。提高退火温度，减少循环数；

2) 模板浓度太高。减少模板用量或将模板稀释 10 倍后扩增；

3) 引物特异性差。优化引物设计。

仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。