土壤中性蛋白酶(SNPT)测试盒说明书

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。S-NPT 在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

测定原理：

中性条件下，S-NPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在 680nm 有特征吸收峰。

实验中所需仪器及设备：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96 孔板、双蒸水

试剂组成和配置：

试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 6ml 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂 4℃保存；

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 2mL 试剂七，沸水浴加热溶解，然后加入 8ml

试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂 4℃保存；

试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 30ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存；

试剂五：液体 8mL×1 瓶，4℃保存；

试剂六：液体 1.5mL×1 支，0.05mg/ml 标准酪氨酸溶液，4℃保存；

试剂七：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；

样品处理：

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。

测定操作：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 680nm，蒸馏水调零。

2、样本测定：

混匀，40℃水浴 20min，8000g 25℃离心 10min，取上清液 200μL，680nm 下读取各管吸光值 A

注意：标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

S-NPT 活性计算：

单位定义：每天每 g 土样中产生 1mg 酪氨酸为一个 S-NPT 活力单位。

S-NPT(mg/d/g 土样)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=24×(A 测定管-A对照管)÷A 标准管

C 标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.4mL；T：反应时间，30min=1/48d； W：样本质量，0.02g。

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