原果胶含量测试盒说明书

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

果胶是植物细胞壁主要组成成分之一，分为水溶性果胶和不溶性果胶，即原果胶。因其具有良好的乳化、增稠和凝胶作用，在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。

测定原理

原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶，并进一步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物，在 530 nm 处有特征吸收峰。 

需自备的仪器和用品

天平、研钵、常温离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、浓硫酸和蒸馏水。 

试剂的组成和配制

提取液一：液体 100mL×2 瓶，4℃保存。

提取液二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存。

试剂一：浓硫酸，自备。

试剂二：液体 2mL×1 支，4℃保存。

试剂三：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存。 

样品处理

将组织样品捣碎，按照样品质量(g)和提取液一体积(mL)为 1: 20 的比列（建议取约0.05g 样品，加入 1mL 提取液一），置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min，取出冷却后于5000g、25℃离心 10min，去掉上清，沉淀中再加入 1mL 提取液一重复操作一次，离心后去上清。沉淀中加入 1mL 蒸馏水，50℃水浴 30min，冷却后 5000g、 25℃离心 10min，去掉上清。

沉淀中再加入 1mL 提取液二，置于 90℃恒温水浴锅中水解 1h，取出冷却后于8000g、25℃离心 15min，取上清液待测。 

测定操作表

注意：空白管和标准管只需测定一次。

计算公式

原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C 标准×V 标) ×△A2÷△A1÷(W×V 样÷V 样总) 

                                     =0.25×△A2÷△A1÷W

C 标准：标准品浓度，0.25mg/mL；V 标：反应体系中加入标准品体积，0.02mL；V样：反应体系中加入样品体积，0.02mL； V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g。

注意事项

1. 浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。

2. 若吸光值超过 1，可将样本提取液进行适当稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

3. 最低检出限为 10μg/g。

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