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DNA退火缓冲液(5×)
产品简介：
DNA寡核苷酸退火缓冲液(Annealing Buffer for DNA Oligos)简称为DNA退火缓冲液，是一种可用于DNA oligo退火的缓冲液，可用于常规的DNA oligo的退火，尤其适合于较难退火的用于RNAi (也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。由于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列，自身易形成发夹结构，从而影响两条DNA oligo的正确退火。
Leagene Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)能有效避免DNA oligo自身形成发夹结构，并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接，转化后可以得到大量的阳性克隆。该本试剂操作简单，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)按照一定比例混合后，置于PCR仪上进行程序降温，约90min即可完成。
产品组成：
试剂(A): Annealing Buffer for DNA Oligos(5×) | 1ml | -20℃ |
试剂(B): Nuclease-Free Water | 5ml | RT |
使用说明书 | 1份 | |
操作步骤(仅供参考)：
1、 把待退火的DNA oligo用经灭菌的超纯水或Nuclease-Free Water配制成50μM，同时溶解Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)，混匀备用。
2、 按如下退火反应体系操作：
Nuclease-Free Water | 40μl |
Annealing Buffer for DNA Oligos(5×) | 20μl |
DNA oligo A(50μM) | 20μl |
DNA oligo B(50μM) | 20μl |
Tatal | 100μl |
按照上述顺序，依次加入并混匀，如果所用PCR仪没有加热盖，可加入Mineral Oil防止液体挥发。
3、 按如下PCR仪的退火条件：
步骤 | 温度 | 时间 | 作用 |
1 | 95℃ | 2min | Oligo充分变性 |
2 | 每90s下降1℃，降至25℃ | 约90min | 程序退火 |
3 | 4℃ | 长期保存 | 暂时存放 |
4、退火后可直接用于连接反应，也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应，用纯化试剂盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%，以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。
注意事项：
避免反复冻融，以免效率下降。
该试剂只适合于DNA oligo的退火，不适用于RNA oligo 的退火。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。