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多聚半乳糖醛酸酶(PG)测试盒 微量法 XYP9082

是一种细胞壁结合蛋白,可以催化果胶分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解,参与果胶的降解,使细胞壁结构解体,导致果实软化,与果实成熟、叶和花的脱落、病原物防御,细胞伸展发育以及木质化有关

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多聚半乳糖醛酸酶(PG)测试盒说明书

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)是一种细胞壁结合蛋白,可以催化果胶分子中 α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解,参与果胶的降解,使细胞壁结构解体,导致果实软化,与果实成熟、叶和花的脱落、病原物防御,细胞伸展发育以及木质化有关,在植物抗病性和食品贮藏保鲜领域具有较高的研究价值。

测定原理

多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸,具有还原性醛基,与 DNS 试剂反应生成红棕色物质,在 540nm 有特征吸收峰,测定 540nm 处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 8mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存。

酶液提取

1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。16000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 16000g,4℃离心 10min,取上清置于冰上待测。

3.培养液:直接检测。

测定操作表

2023091903380230643

酶活性计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 3.9642x - 0.008;R2= 0.9996;x 为标准品浓度,mg/mL;y 为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG 活性(mg/h/mg prot)= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T

                                           = 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG 活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T

                                        = 2.523×(ΔA+0.008)÷W

3.按液体体积计算

酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每毫升培养液每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG 活性(mg/h/mL)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷V 样÷T=2.523×(ΔA+0.008)

4. 按细胞数量计算

酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每 104个细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG 活性(mg/h/104cell)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T

                                         = 2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量

V 反总:反应总体积,0.15mL;V 样:反应中样本体积,0.03mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,0.5h

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 1.9821x - 0.008,R2= 0.9996;x 为标准品浓度,mg/mL;y 为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG 活性(mg/h/mg prot)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T

                                          = 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位(U)。

PG 活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T

                                       = 5.045×(ΔA+0.008)÷W

3.按液体体积计算

酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每毫升培养液每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位(U)。

PG 活性(mg/h/mL)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷V 样÷T=5.045×(ΔA+0.008)

4. 按细胞数量计算

酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每 104个细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位(U)。

PG 活性(mg/h/104cell)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T

                                         = 5.045×(ΔA+0.008)÷细胞数量

V 反总:反应总体积,0.15mL;V 样:反应中样本体积,0.03mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,0.5h

注意事项

煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸 10 分钟,以将酶彻底灭活。

仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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