1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。待测样本应尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。

标本收集与试剂准备:

2. 洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水）

3. 标准品配制：取7个1.5ml离心管，分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。从第一至七管中分别加入标准品/样品稀释液300ul。在第一管中加入标准品溶液300ul（标准品浓度），置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第六管中吸出300ul弃去，第七管为空白对照。(建议标准曲线使用以下浓度: 1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank)。

4. 生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟，用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。

5. ABC复合物工作液配置:使用前20分钟，用ABC复合物稀释液将100×浓缩ABC复合物稀释成1×工作液，当日使用，剩余弃之。

6. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。

检测程序:

1. 微孔板使用前洗板2次，向滤纸印干后，请立即使用。

2. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板混匀后置37℃，90分钟,然后甩去酶标板内液体，向滤纸上印干，不洗板。

3. 每孔加入1×的生物素化抗体工作液100ul，混匀后置37℃，60分钟。

4. 洗板：用洗涤液将微孔板充分洗涤3次，向滤纸上印干。

5. 每孔加入1×的ABC复合物工作液100ul，混匀后置37℃，30分钟。

6. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤5次，向滤纸上印干。

7. 每孔加入底物工作液90ul，混匀后置37 ℃暗处反应3-20分钟（具体显色时间根据显色结果而定）。

8. 每孔加入50ul终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果判断与计算：

1. 所有OD值建议减除空白值后再行计算，如空白OD低于0.1，也可以直接计算。

2. 以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘上稀释倍数即可。

注意事项:

1. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测，每次检测都应做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象，37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3. 检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩余板条需封好，放回袋中2 个月内用完。

4. 试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。

5. 仅用于科研，不能用于临床诊断！