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SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒 XY900335TZ

SuperTOPO - Amp flat end cloning kits

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¥ 1320.00 /盒
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SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒

产品及特点 本产品是基于 Topoisomerase 能够在几秒钟之内高速连接 DNA 片段的原理开发的无背景克隆试剂盒,它使用了本公司通过定点突变改良的 TOPO酶,连接效率比野生型更高。本试剂盒具有下列特点: 

1. 高效快速,连接反应几乎在几秒钟内完成,连接率几乎达到 100%。 

2. 适用于 pfu、KOD 等高保真聚合酶扩增的平末端片段的克隆。 

3. 无杂带或引物二聚体的PCR 扩增产物可以不经过纯化直接用于连接反应。 

4. 零背景,无需 IPTG-X-Gal 蓝白斑筛选,故不需要 IPTG-X-Gal 培养基。 

5. 本试剂盒按 10 uL 标准反应体系,有 25 次和 50 次两种规格包装供选择。 

6. 提供含 Amp 和 Kan 两种抗性的载体供选择

规格及成分

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运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。 

自备试剂 DNA 插入片段、感受态细胞、SOB 或 LB 培养基(含抗菌素和不含的) 

使用方法 

1. 如果是 PCR 制备插入片段,所用引物不能磷酸化,使用 pfu、KOD 等产生平末端片段的高保真 DNA 聚合酶。为保证扩增产物的完整性,PCR 循环结束后,再延伸 5-10 分钟,确保片段延伸完全。 

2. 电泳检测并相对定量 PCR 片段(跟 DNA marker 比较)。根据插入片段长度和下表确定每次连接反应需要的最佳用量:

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3. 在一个干净的塑料离心管中,室温下(不要放在冰上)设置如下连接反应体系:

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注意:如果使用未经纯化的 PCR 产物,则需要加入量不能超过 1 uL,否则 PCR 体系会干扰连接体系。 

4. 轻柔吹打混匀后,短暂离心,常温(20-30℃)放置 0-5 分钟。如果在冬天室温低于 20℃,建议使用 25℃水浴或金属浴。注意:连接时间超过 5分钟的话连接效率会降低。 

5. 如果当天不转化,可以将离心管放-20℃保存。如果转化,则取 5 uL 连接液加到 50-100 uL 刚刚融化的感受态细胞中,轻柔混匀。注意:本产品要求感受态细胞的转化效率不得低于 5 x 10E7cfu/ug。 

6. 如果片段长度小于 2 Kb,则不需要冰浴和热激,直接在离心管中加入 500uL 不含抗菌素的 SOC 或 LB 培养基,然后取 200 uL 涂盘。也可以先3000g 离心 2 分钟后,弃掉大部分上清,只留约 100 uL 左右,然后重悬细菌后全部涂盘在含 Amp(对 SuperTOPO-Amp)或 Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上,37℃过夜培养。 

7. 如果片段长度长于 2 Kb,则按常规转化方式,先冰浴 2-30 分钟,然后42℃热激 30 秒,冰上防放置 2 分钟,再在离心管中加入 500 uL 不含抗菌素的 SOC 或 LB 培养基,37℃ 250 rpm 培养 60 分钟,然后取 200uL 涂盘。也可以先 3000g 离心 2 分钟后,弃掉大部分上清,只留约 100uL 左右,然后重悬细菌后全部涂盘在含 Amp(对 SuperTOPO-AmpBlunt 载体)或 Kan(对 SuperTOPO-Kan Blunt 载体)的培养皿上,37℃过夜培养。 

8. 用 M13F/M13R 通用引物进行菌落 PCR 或直接测序来鉴定重组子。

仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。

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